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二氧化锆包覆的二氧化硅核壳型填料制备及选择吸附磷脂

发布时间 | 2017-11-10 点击量 | 75

磷脂( Phospholipids,PLs)是含有磷酸的脂类,它为两性分子,一端为亲水的含磷酸基团的极性头基,另一端为疏水的含有两条长脂肪酸链的非极性尾部。磷脂是生物体内细胞膜的重要组成部分,在细胞信号传导和细胞凋亡方面发挥着重要作用,它也与许多疾病的发生有关,可作为某些疾病的信号分子。磷脂分为两大类:甘油磷酯类和鞘脂类,甘油磷脂又分为卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇等,所以磷脂的种类繁多。

 基于磷脂结构的复杂性和多样性,磷脂分析是一个挑战。常用的有薄层色谱法( TLC)、核磁共振( NMR)、质谱(MS)、气相色谱.质谱联用(GC-MS)和液相色谱.质谱联用(LC-MS)等技术。TLC法灵敏度和分辩率都较低,且易引起磷脂的氧化和分解;CC-MS不适合于直接分析磷脂,因为磷脂没有挥发性,需要经水解、甲酯化等处理;3lp_NMR可利用磷原子3lp来分析各种磷脂,但NMR法的灵敏度较低,仅限于磷脂酰胆碱等组织中含量较高的磷脂样品的测定;MS法,特别是电喷雾质谱(ESI-MS)是目前磷脂分析中应用最多的软电离法,ESI-MS法前处理简单,分析时间短,不足之处在于难以分析丰度较低的磷脂。在此基础上,Han等又开发了基于源内分离的“鸟枪法”和多维质谱法测定磷脂和其他脂质分子。HPLC-ESI-MS具有高分辨率、高灵敏度和特异性强等优点,是磷脂分析的较好工具,但仪器价格昂贵。蒸发光散射检测器(Evaporative light scattering detector,ELSD)作为一种新型通用型检测器,它价格便宜,且无TLC和GC-MS分析磷脂的缺点,在分析过程中不易引起磷脂的氧化和分解,适合直接分析磷脂,在磷脂分析中具有很好的可行性。

   在生物样品中磷脂种类繁多,结构复杂,低丰度检测困难,且干扰较多。如果在应用上述方法分析前,先对磷脂进行选择性提取,对于体内的磷脂分析,特别是对发现一些微量的信号分子是很重要的。常用的磷脂提取方法有甲基叔丁基醚( Methyl tert-butyl ether,MTBE)液.液萃取法和固相萃取法(SPE)。SPE比较常用的是氨丙基、氨基或二醇基修饰的硅胶等正相材料,但这些方法选择性普遍不高。

   金属氧化物(如Zr02等)由于具有路易斯酸一碱的特性,在酸性条件下可以与带有磷酸基团的物质结合,达到与其它物质分离的目的,在碱性条件下洗脱则可达到富集的目的,故金属氧化物选择性富集磷脂是非常有前景的方法,但Zr02本身存在比表面积小,颗粒粒径小,不适合做SPE填料等缺点。本研究采用NH3/H2O内部水解法,将Zr02负载在球形硅胶微球之上,制成核壳型Zr02/Si02颗粒,并填充为SPE小柱,用于选择性富集磷脂,并采用RPLC-ELSD进行评价。结果表明,本研究获得的核壳型Zr02/Si02颗粒具有良好的富集效率,在生物样品分析中有很好的应用前景。


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